Analisi dell'Advantame negli Alimenti mediante Cromatografia Liquida ad Alte Prestazioni

Analisi dell'Advantame negli additivi alimentari

Questo esperimento è stato condotto con riferimento a "GB 1886.377-2024 Standard nazionale per la sicurezza alimentare - Additivo alimentare Advantame", utilizzando il sistema di cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) serie LC3200 di Wayeal, dotato di un rivelatore UV per l'analisi. I risultati sperimentali hanno dimostrato un'eccellente idoneità del sistema, con una forma dei picchi ben definita sia per l'acido benzoico che per l'advantame. Non ci sono altri picchi intorno ai picchi target e gli elevati numeri di piatti teorici hanno confermato la conformità a tutti i requisiti di prova. Il coefficiente di correlazione lineare ha superato 0,999. L'esperimento ha mostrato un'eccellente ripetibilità, con deviazioni standard relative (RSD) del tempo di ritenzione dello 0,027% per l'acido benzoico e dello 0,049% per l'advantame, e RSD dell'area del picco dello 0,184% e dello 0,133%, rispettivamente. I limiti di rilevamento teorici sono 0,066 mg/L per l'acido benzoico e 0,113 mg/L per l'advantame. Nessun analita target è stato rilevato nel test del campione. Tutti i dati analitici hanno soddisfatto i requisiti di prestazione strumentale specificati nella metodologia farmacopeica.

Parole chiave: Advantame, cromatografia liquida ad alte prestazioni, rivelatore UV.

1. Metodo sperimentale

1.1 Configurazione dello strumento

Tabella 1 Elenco della configurazione del sistema HPLC

1.2 Materiali sperimentali e attrezzature ausiliarie

Acetonitrile: grado cromatografico

Standard di acido benzoico

Standard di advantame

1.3 Condizioni di prova

Tabella 2 Condizioni di analisi HPLC

1.4 Preparazione della soluzione

1.4.1 Soluzione standard interno

Pesare accuratamente 40 mg di acido benzoico, sciogliere in un solvente misto acqua-acetonitrile e diluire con precisione a 50 mL.

1.4.2 Soluzione standard

Pesare accuratamente 40 mg di advantame, sciogliere in un solvente misto acqua-acetonitrile e diluire con precisione a 50 mL per preparare una soluzione madre standard da 0,8 mg/mL. Pipettare con precisione 8 mL, 9 mL, 10 mL, 11 mL e 12 mL della soluzione madre standard in cinque palloni volumetrici separati. Aggiungere 5 mL di soluzione standard interno a ciascun pallone, quindi diluire a 50 mL con solvente misto acqua-acetonitrile per preparare soluzioni di lavoro standard a concentrazioni di 0,128 mg/mL, 0,144 mg/mL, 0,160 mg/mL, 0,176 mg/mL e 0,192 mg/mL per la costruzione della curva di taratura.

1.4.3 Preparazione del campione

Pesare accuratamente 40 mg del campione di prova, sciogliere in un solvente misto acqua-acetonitrile e diluire con precisione a 50 mL. Pipettare 10 mL della soluzione preparata in un pallone volumetrico, aggiungere 5 mL della soluzione standard interno e diluire a 50 mL con un solvente misto acqua-acetonitrile. Filtrare la soluzione attraverso un filtro a membrana per il test.

2. Risultati e discussione

2.1 Idoneità del sistema

Figura 1 Cromatogramma del test di idoneità del sistema

Tabella 3 Dati del test di idoneità del sistema

Nota: Come mostrato nella tabella sopra, il test di idoneità del sistema ha mostrato eccellenti forme dei picchi sia per l'acido benzoico che per l'advantame, con fattori di coda inferiori a 1,2. La risoluzione ha superato 1,5 e gli elevati numeri di piatti teorici hanno pienamente soddisfatto i requisiti del metodo analitico.

2.2 Test della curva di taratura

Fig. 2 Rapporto di prova della curva di taratura dell'advantame

Nota: I risultati sperimentali hanno dimostrato un'eccellente linearità per la quantificazione dell'advantame, con un coefficiente di correlazione (R²) superiore a 0,999, che soddisfa i requisiti dell'esperimento.

2.3 Test di ripetibilità

Fig. 3 Cromatogramma del test di ripetibilità a sei iniezioni

Tabella 4 Dati del test di ripetibilità dell'acido benzoico (6 iniezioni)

Tabella 5 Dati del test di ripetibilità dell'advantame (6 iniezioni)

Nota: Dai dati nella tabella sopra, la ripetibilità del tempo di ritenzione dell'acido benzoico e dell'advantame è dello 0,027% e dello 0,049%, e la ripetibilità dell'area del picco è dello 0,184% e dello 0,133%, rispettivamente, il che mostra una buona ripetibilità.

2.4 Test del limite di rilevamento

Fig. 4 Cromatogramma della soluzione standard di acido benzoico 0,8 mg/L e advantame 1,28 mg/L

Tabella 6 Risultati del test per la soluzione standard di acido benzoico 0,8 mg/L e advantame 1,28 mg/L contenente

Nota: In base ai dati del campione standard nella tabella sopra, con una concentrazione di acido benzoico di 0,8 mg/L e una concentrazione di advantame di 1,28 mg/L, i limiti di rilevamento teorici per l'acido benzoico e l'advantame, calcolati in base a un rapporto segnale-rumore di 3 volte, sono rispettivamente 0,066 mg/L e 0,113 mg/L.

2.5 Test di un marchio di bevanda

Fig. 5 Cromatogramma di una bevanda di marca A

Nota: Nessun advantame è stato rilevato nella bevanda di marca testata.

3. Conclusione

Questo esperimento è stato condotto in conformità con lo “GB 1886.377-2024 Standard nazionale per la sicurezza alimentare - Additivo alimentare Advantame" utilizzando il sistema di cromatografia liquida ad alte prestazioni Wayeal LC3200, dotato di un rivelatore UV per l'analisi. I risultati sperimentali hanno dimostrato un'eccellente idoneità del sistema, con una forma dei picchi ben definita sia per l'acido benzoico che per l'advantame. Non ci sono altri picchi intorno ai picchi target e gli elevati numeri di piatti teorici hanno confermato la conformità a tutti i requisiti di prova. Il coefficiente di correlazione lineare ha superato 0,999. L'esperimento ha mostrato un'eccellente ripetibilità, con deviazioni standard relative (RSD) del tempo di ritenzione dello 0,027% per l'acido benzoico e dello 0,049% per l'advantame, e RSD dell'area del picco dello 0,184% e dello 0,133%, rispettivamente. I limiti di rilevamento teorici sono 0,066 mg/L per l'acido benzoico e 0,113 mg/L per l'advantame. Nessun analita target è stato rilevato nel test del campione. Tutti i dati analitici hanno soddisfatto i requisiti di prestazione strumentale specificati nella metodologia farmacopeica.