Determinazione dell'analogo idrossilato della metionina nei mangimi mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni Wayeal

Il metionina idrossi-analogico (MHA) è un additivo di acido organico ampiamente utilizzato nell'industria dei mangimi come sostituto della metionina.suini (porcellini e suini da finitura), ruminanti (bovini da latte e bovini da carne) e acquacoltura (pesce e gamberetti).miglioramento dell'ambiente intestinale degli animali, e potenziare l' immunità degli animali.

La cromatografia liquida ad alte prestazioni, unita al rilevamento UV, è adatta per l'analisi di vari campioni complessi di mangimi, grazie alla sua eccellente efficienza di separazione.forte resistenza alle interferenze della matrice, elevata sensibilità di rilevamento e risultati quantitativi stabili e affidabili.Questa sperimentazione è stata condotta in conformità alla norma "Determinazione dell'analogo idrossi metionina nel mangime mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni" (GB/T 19371-2025).. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, che consente sia il rilevamento qualitativo che l'analisi quantitativa precisa dell'analogio idrossi metionina in vari tipi di campioni di mangimi.

Parole chiave: mangimi; analogo idrossi metionina; cromatografia liquida ad alte prestazioni.

1Strumenti e reagenti

1.1 Elenco delle configurazioni HPLC

Tabella 1 Elenco delle configurazioni dei sistemi di cromatografia liquida ad alte prestazioni

1.2 Elenco dei reagenti e delle norme di riferimento

Tabella 2 Elenco dei reagenti e delle norme di riferimento

1.3 Condizioni di cromatografia liquida

Tabella 3 Condizioni di cromatografia liquida ad alte prestazioni

1.4 Materiali sperimentali e attrezzature ausiliarie

un detergente ad ultrasuoni;

miscelatore vortex;

Centrifughe ad alta velocità;

bilanciamento analitico;

Shaker.

2Metodo sperimentale

2.1 Preparazione della soluzione

2.1.1 Soluzioni di curva standard:

Pesare con precisione una quantità adeguata di metionina idrossi-analogico standard di riferimento e dissolverlo in 10% di acetonitrile per preparare una serie di soluzioni standard a concentrazioni di massa pari a 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.020 anni.0Quaranta.0, e 80.0μAggiungere con precisione 0,1 ml di soluzione di idrossido di potassio al 50% e vorticare per 15 secondi.Poi aggiungi con precisione 0.2 ml di soluzione al 50% di acido fosforico e vortice per altri 15 secondi. Centrifugare a 8000 r/min per 5 minuti. Passare il supernatante attraverso un filtro a membrana microporousa prima dell'analisi.

2.1.2 Soluzioni di campione di prova:

Pesare 5 g di campione di mangime in un contenitore, aggiungere 50 ml di soluzione di acetonitrile al 10% e mescolare per 30 minuti.e conservare il supernatante per un uso successivo. Trasferire con precisione 5 ml del supernatante sopra indicato in una provetta tappata da 15 ml. Aggiungere con precisione 0,1 ml di soluzione di idrossido di potassio al 50% e vortice per 15 s. Poi aggiungere con precisione 0.2 ml di soluzione al 50% di acido fosforico e vortice per altri 15 s. Centrifugare a 8000 r/min per 5 minuti. Passare il supernatante attraverso un filtro a membrana microporosa prima dell'analisi. Preparare due soluzioni parallele di campioni di prova.

2.1.3 Soluzioni di prova di recupero:

Trasferire con precisione 2,5 ml di supernatante del campione e 2,5 ml di soluzione di ciascuna serie standard in un provettaio tappato da 15 ml. Aggiungere con precisione 0.1 ml di soluzione al 50% di idrossido di potassio e vortice per 15 s. Poi aggiungere con precisione 0,2 ml di soluzione al 50% di acido fosforico e vortice per altri 15 s. Centrifugare a 8000 r/min per 5 minuti.Passare il supernatante attraverso un filtro a membrana microporosa prima dell'analisi.

3Risultato dell' esperimento

3.1 Linearità e gamma

Tabella 4 Tabella di concentrazione della curva standard

Figura 1 Curva standard dell'analogio idrossi metionina

Nota: Sono state prese quantità adeguate di soluzione standard di riferimento dell'analogue idrossi-metionina e diluite in serie fino a una serie di concentrazioni per la preparazione della curva standard.L'intervallo lineare era 0..5️80.0μg/mL e il coefficiente di correlazione (R) era 0.99983, indicando un'eccellente linearità per l'analito.

3.2 Precisione

Figura 2 Cromatogrammi sovrapposti di prova di precisione per la norma di riferimento (20,0 μg/mL)

Tabella 5 Dati di prova di precisione per la norma di riferimento (20,0 μg/mL)

Nota: lo standard di riferimento di metionina idrossi-analogico (a una concentrazione di 20.0μLa ripetibilità (RSD) del tempo di ritenzione è stata dello 0,084%, e quella dell' area di picco dello 0,391%, indicando una buona precisione dello strumento.

3.3 Recupero

Figura 3 Cromatogrammi sovrapposti di prova di recupero per l'analogio idrossi-metionina nel mangime

Tabella 6 Dati di prova di recupero per l'analogio idrossi-metionina nei mangimi

Nota: il campione è stato aggiunto allo standard di riferimento a una concentrazione di 40.0μIl recupero ottenuto è stato dell'88,56%, indicando una buona precisione del metodo.

3.4 Limite di rilevamento (LOD)

Fig. 4 Cromatogramma di Methionina Idrossi Analogue Standard (2.5μg/mL)

Tabella 7 Dati di prova per lo standard di riferimento di analogi di metionina idrossi (2.5μg/mL)

Nota: Sulla base dei dati di prova della methionina idrossi-analogico standard di riferimento a 2,5 μg/ml come mostrato nella tabella sopra, il limite teorico di rilevamento (LOD) è stato calcolato come 0.033μg/mL a un rapporto segnale/rumore di 3 (S/N = 3).

3.5 Prova di un campione di mangime

Figura 5 Cromatogramma di un campione di mangime

Nota: l'analogio idrossi metionina è stato rilevato in un campione di mangime a una concentrazione di 0.402μg/mL.

4Conclusioni

Questo esperimento è stato condotto in conformità alla norma "Determinazione dell'analogio idrossi metionina negli alimenti per animali mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni" (GB/T 19371-2025),utilizzando il cromatografo liquido Wayeal serie LC3400 ad alte prestazioni dotato di un rivelatore UVI risultati sperimentali hanno dimostrato che il picco obiettivo presentava una buona simmetria e un elevato numero teorico di piastre.5️80.0μper g/mL, il coefficiente di correlazione (R) era superiore a 0.9998I valori RSD per il tempo di ritenzione e l'area di picco dello standard di riferimento MHA (20.0μLa ripresa di MHA nei campioni di mangimi è aumentata a 40%.0μIl limite teorico di rilevazione (LOD) per l'MHA è stato determinato a 0.033μMHA è stato rilevato con successo in un campione di mangime a una concentrazione di 0.402μTutti i dati di cui sopra soddisfano i requisiti del metodo della farmacopea per le prestazioni dello strumento.