Determinazione dei fosfati multipli negli alimenti mediante cromatografo ionico Wayeal

Questa nota applicativa introduce la determinazione di più fosfati negli alimenti secondo il Metodo 2 di GB 5009.256-2025 utilizzando il sistema di cromatografia ionica Wayeal.

Un'assunzione eccessiva di fosfati può interrompere il metabolismo del calcio-fosforo nel corpo, portando a un ridotto assorbimento dei minerali o ad altri problemi di salute. Il rilevamento accurato aiuta le aziende a controllare scientificamente l’utilizzo degli additivi, a bilanciare la qualità e la sicurezza degli alimenti e fornisce supporto dati per l’ottimizzazione delle formulazioni.

Parole chiave:Cromatografia ionica, anioni, alimenti.

1. Strumento e Reggenti

1.1 Elenco delle configurazioni del cromatografo ionico

Tabella 1 Elenco delle configurazioni dello strumento

1.2 Reagenti e standard

Tabella 2 Elenco di reagenti e standard

1.3 Materiale sperimentale e apparecchiature ausiliarie

Filtro idrofilo a siringa in scatola (0,45μm)

Iniettore (20 ml)

2. Metodo dell'esperimento

2.1 Pretrattamento del campione

Pesare 1-2 g (precisione fino a 0,001 g) del campione in una provetta colorimetrica da 50 ml. Aggiungere 22,5 ml di soluzione di idrossido di sodio 100 mmol/L. Miscelare al vortex per 1 minuto, quindi estrarre mediante ultrasuoni a 80°C per 30 minuti, agitando ogni 5 minuti per garantire la completa dispersione del campione. Dopo il raffreddamento a temperatura ambiente, diluire a 50 ml con acqua ultrapura e mescolare accuratamente. Trasferire l'intera soluzione in una provetta da centrifuga da 50 ml e centrifugare a 8.000 giri/min per 5 minuti. Misurare 5 ml di surnatante in un'altra provetta colorimetrica da 50 ml, aggiungere 1 ml di acido nitrico al 30% e agitare su vortex per mescolare. Posizionare la provetta a bagnomaria a 90 °C± 5 °C e scaldare per 60 minuti. Dopo il riscaldamento, rimuovere la provetta e raffreddarla a temperatura ambiente in un bagno di acqua fredda. Infine diluire a volume con acqua e mescolare bene.

Pipettare 2 ml della soluzione in una provetta da centrifuga da 10 ml, quindi diluire fino alla tacca con acqua ultrapura. Posizionare la provetta in una centrifuga refrigerata e centrifugare a 4 °C e 8.000 giri/min per 5 minuti. Raccogliere il surnatante e passarlo in una provetta 0,45µmembrana filtrante m. Quindi prelevare un volume adeguato del filtrato per l'analisi strumentale.

Nota: nel metodo standard originale, vengono aggiunti separatamente 45 ml di soluzione di idrossido di sodio 50 mmol/L. Per questo test, per facilitare la regolazione volumetrica dovuta alla maggiore quantità aggiunta, la soluzione di estrazione è stata modificata in 22,5 ml di soluzione di idrossido di sodio 100 mmol/L aggiunti separatamente. Questa modifica non pregiudica la validità dei risultati sperimentali.

2.2 Condizioni dell'esperimento

Tabella 3 Condizioni di test degli anioni

3. Risultato dell'esperimento

3.1 Cromatografia standard

La determinazione di più fosfati negli alimenti secondo il Metodo 2 di GB 5009.256-2025 è stata completata entro 30 minuti. I risultati del test hanno dimostrato buona linearità e ripetibilità lineare, eccellenti limiti di rilevamento e quantificazione, precisione soddisfacente, forte ripetibilità del campione, parallelismo affidabile del campione, ripetibilità costante del campione arricchito ed eccellenti tassi di recupero. Tutti gli indicatori di prestazione soddisfano i requisiti specificati in GB 5009.256-2025 per la determinazione di più fosfati negli alimenti.

Cromatogramma di sovrapposizione della curva standard

3.2 Gamma lineare

Prelevare una quantità adeguata di soluzione standard e diluirla per preparare la curva di calibrazione. La deviazione tra i risultati del rilevamento lineare e le concentrazioni note era inferiore alla deviazione massima consentita, con un valore R superiore a 0,999, indicando un'eccellente linearità per ciascun componente.

Tabella 4 Tabella dell'intervallo lineare per lo ione fosfato

Risultati di linearità per lo ione fosfato

3.3 Test di ripetibilità della linearità

Cromatogrammi di prova di ripetibilità per il punto S1 a basso valore della curva standard con 7 iniezioni consecutive

Cromatogrammi di test di ripetibilità per punto di valore medio S4 della curva standard con 7 iniezioni consecutive

Cromatogrammi di prova di ripetibilità per il punto S7 ad alto valore della curva standard con 7 iniezioni consecutive

Dati del test di ripetibilità per la curva di calibrazione

3.4 Prova LOD

Cromatogramma di prova LOD

Dati di prova LOD

3.5 Prova di precisione

Cromatogrammi sovrapposti di due test indipendenti

Dati di prova di precisione

3.6 Cromatogramma di prova del campione bianco

Cromatogramma di prova del campione bianco

Dati del test del campione bianco

3.7 Cromatogrammi per test di parallelismo e ripetibilità dei campioni

Cromatogrammi sovrapposti del campione parallelo di gamberetti congelati 1 (8 iniezioni)

Cromatogrammi sovrapposti di gamberetti congelati Campione parallelo 2 (8 iniezioni)

Dati sui test dei gamberetti congelati

3.8 Spike del campione e test di ripetibilità del picco

Cromatogramma sovrapposto di gamberetti congelati arricchiti al 50% (8 iniezioni)

Dati dei test di ripetibilità per gamberetti congelati con livello di picco del 50%.

Cromatogrammi sovrapposti di gamberetti congelati con livello di picco del 100% (8 iniezioni)

Dati dei test di ripetibilità per gamberetti congelati con livello di punte del 100%.

Cromatogrammi sovrapposti di gamberetti congelati con livello di picco del 150% (8 iniezioni)

Dati dei test di riproducibilità per gamberetti congelati con livello di picco del 150%.

Dati dei test di picco per i gamberetti congelati

Sulla base dei dati forniti, i picchi cromatografici mostrano una buona forma e i coefficienti di correlazione lineare sono tutti superiori a 0,999. La determinazione dei fosfati negli alimenti è stata effettuata utilizzando la colonna cromatografica di idrossido di idrogeno di NovaChrom (HS-9A-PP, 4 × 250 mm, 9μm), con riferimento al secondo metodo specificato in GB5009.256-2025 per la determinazione di più fosfati negli alimenti. I risultati sperimentali dimostrano che il secondo metodo presenta un'eccellente linearità e riproducibilità lineare. Mostra inoltre un eccezionale limite di rilevamento (0,003 g/kg), limite di quantificazione (0,009 g/kg) e precisione. Il metodo dimostra buona ripetibilità, parallelismo per i campioni ed eccellenti tassi di recupero dei picchi. Sia il limite di rilevamento che quello di quantificazione sono ben al di sotto dei requisiti standard di 0,05 g/kg e 0,1 g/kg, rispettivamente. L'RSD delle aree dei picchi per la ripetibilità del campione variava dallo 0,515% allo 0,934%. La differenza assoluta tra le due determinazioni indipendenti ottenute in condizioni di ripetibilità per il campione è stata pari allo 0,37% della media aritmetica. Nei test di precisione, la differenza assoluta tra le due determinazioni indipendenti ottenute in condizioni di ripetibilità è stata dello 0,06% della media aritmetica, che non supera il requisito standard del 15%. I tassi di recupero variavano dal 92,57% al 102,15%. Questo metodo è conforme ai requisiti GB5009.256-2025 per la determinazione di più fosfati negli alimenti.

4. Conclusione

Questa analisi è stata condotta utilizzando il cromatografo ionico Wayeal per determinare più fosfati negli alimenti secondo il Metodo 2 di GB5009.256-2025. Il metodo consente una quantificazione accurata del contenuto di fosfati negli alimenti, verificandone la conformità agli standard nazionali (come GB 5009.256-2025). Ciò aiuta a impedire alle imprese di superare i limiti consentiti di additivi e supporta l’integrità dei sistemi normativi sulla sicurezza alimentare.