Determinazione dei residui di antibiotici chinolonici nella carne di pollo mediante sistema di spettrometria di massa a cromatografia liquida LCMS-TQ9200 di Wayeal (LC-MS/MS)
Lo standard nazionale cinese per la sicurezza alimentare "GB 31650-2019 Limiti massimi di residui per i farmaci veterinari negli alimenti" specifica i limiti massimi di residui (LMR) di alcuni antibiotici chinolonici nei prodotti alimentari di origine animale. Inoltre, "GB 31658.17-2021 Standard nazionale per la sicurezza alimentare - Determinazione dei residui di tetracicline, sulfonamidi e chinoloni negli alimenti di origine animale mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem" specifica il metodo analitico LC-MS/MS e i corrispondenti limiti di quantificazione (LOQ) per 13 antibiotici chinolonici. Questa nota applicativa presenta i risultati convalidati con successo per l'analisi di 13 residui di antibiotici chinolonici nella carne di pollo utilizzando il sistema di spettrometria di massa tandem a quadruplo polo a cromatografia liquida LCMS-TQ9200 di Wayeal (LC-MS/MS).
Parole chiave: LC-MS/MS, chinoloni, residui di farmaci veterinari, sicurezza alimentare.
Sistema di spettrometria di massa a cromatografia liquida-tandem Wayeal LCMS-TQ9200
Metodo di cromatografia liquida
Colonna cromatografica: C18 3.0x100mm
Fase mobile: A: acido formico allo 0,1% in metanolo, B: soluzione di acido formico allo 0,1%
Portata: 0,4 mL/min
Temperatura della colonna: 45°C
Volume di iniezione: 3μL
Metodo di spettrometria di massa
Tabella 1 Parametri della sorgente ionica di spettrometria di massa
| Sorgente ionica |
ESI, modalità ioni positivi |
| Tensione della sorgente ionica |
5500V |
| Portata del gas di desolvatazione |
18000 mL/min |
| Portata del gas nebulizzatore |
2000 mL/min |
| Portata del gas di cortina |
5000 mL/min |
| Portata del gas di collisione |
800μL/min |
| Temperatura di desolvatazione |
450°C |
| Temperatura del gas di cortina |
150°C |
Tabella 2 Parametri di spettrometria di massa per ciascun composto
| Intervallo lineare |
Q1 |
Q3 |
Potenziale di declusterizzazione (V) |
Energia di collisione (V) |
| 111.26 |
262.1 |
244* |
100 |
25 |
| 160 |
100 |
50 |
| 59.64 |
262.1 |
202 |
115 |
44 |
| 244.1* |
115 |
24 |
| 70.16 |
320.1 |
302.1* |
90 |
27 |
| 233.2 |
90 |
33 |
| 23.74 |
321.2 |
234 |
100 |
38 |
| 303* |
100 |
30 |
| 37.91 |
332.2 |
231 |
100 |
49 |
| 288 |
100 |
25 |
| 28.70 |
334.1 |
316* |
110 |
29 |
| 233.2 |
110 |
35 |
| 48.54 |
352.1 |
265.1* |
110 |
31 |
| 334 |
110 |
29 |
| 105.74 |
358.1 |
340.1* |
100 |
32 |
| 283.1 |
100 |
32 |
| 35.97 |
360.2 |
316.1 |
110 |
27 |
| 245.1* |
110 |
38 |
| 51.67 |
362.1 |
318.3 |
75 |
25 |
| 261.2* |
75 |
34 |
| 190.11 |
363.2 |
72.1* |
100 |
25 |
| 345.2 |
100 |
29 |
| 38.11 |
386.1 |
299.1* |
110 |
38 |
| 342 |
110 |
27 |
| 25.85 |
400.2 |
299.1 |
110 |
38 |
| 382.2 |
120 |
30 |
Nota: lo ione contrassegnato con * è lo ione quantitativo
1. Risultato dell'esperimento
1.1 Forma del picco
La determinazione di 13 antibiotici chinolonici è stata completata entro 11 minuti. Tutti i picchi avevano una buona forma senza il comune fenomeno di tailing degli antibiotici chinolonici. Tutti i composti hanno dimostrato forti risposte del segnale, soddisfacendo i requisiti per la quantificazione sperimentale.Fig. 1 Cromatogramma di 13 antibiotici chinolonici
1.2. Intervallo lineare
Una quantità appropriata di soluzione standard mista di chinoloni è stata diluita in serie per preparare standard di calibrazione che coprono concentrazioni da 2 a 500 ng/mL. La valutazione della linearità ha dimostrato un'eccellente concordanza con le concentrazioni nominali, con tutte le deviazioni entro l'errore massimo consentito. Il coefficiente di determinazione (R²) variava da 0,9921 a 0,9998, confermando una linearità soddisfacente per tutti i componenti.
Tabella 3 Tabella dell'intervallo lineare
Composti
| Intervallo lineare |
Coefficiente di correlazione lineare R |
2Acido ossolinico |
| 111.26 |
0.9973 |
Ciprofloxacina |
| 59.64 |
0.9973 |
Norfloxacina |
| 70.16 |
0.9973 |
Enoxacina |
| 23.74 |
0.9973 |
Ciprofloxacina |
| 37.91 |
0.9973 |
Pefloxacina |
| 28.70 |
0.9973 |
Lomefloxacina |
| 48.54 |
0.9973 |
Danofloxacina |
| 105.74 |
0.9973 |
Enrofloxacina |
| 35.97 |
0.9973 |
Ofloxacina |
| 51.67 |
0.9973 |
Marbofloxacina |
| 190.11 |
0.9973 |
Sarafloxacina |
| 38.11 |
0.9973 |
Difloxacina |
| 25.85 |
0.9973 |
Fig. 2 Risultati dell'intervallo lineare per antibiotici chinolonici selezionati |
1.3. Limite di rilevamento (LOD) e limite di quantificazione (LOQ)
Lo standard nazionale per la sicurezza alimentare GB 31658.17-2021, specifica un limite di rilevamento (MDL) di 2μg/kg e il limite di quantificazione (MQL) di 10μg/kg. In questo metodo, tutti i composti target hanno dimostrato rapporti segnale/rumore significativamente superiori a 3 a 2μg/kg e 10 a 10μg/kg, rispettando pienamente i requisiti di sensibilità specificati nello standard nazionale.
Tabella 4 Rapporti segnale/rumore per i limiti di rilevamento e quantificazione dei composti target
Composto
| SNR (S/N) |
2μg/kg |
| 10μg/kg |
Acido ossolinico |
| 111.26 |
359.11 |
Flumechina |
| 59.64 |
244.73 |
Norfloxacina |
| 70.16 |
392.57 |
Enoxacina |
| 23.74 |
80.26 |
Ciprofloxacina |
| 37.91 |
99.26 |
Pefloxacina |
| 28.70 |
125.81 |
Lomefloxacina |
| 48.54 |
165.84 |
Danofloxacina |
| 105.74 |
348.10 |
Enrofloxacina |
| 35.97 |
120.82 |
Ofloxacina |
| 51.67 |
287.26 |
Marbofloxacina |
| 190.11 |
399.38 |
Sarafloxacina |
| 38.11 |
160.79 |
Difloxacina |
| 25.85 |
149.29 |
Fig. 3 Cromatogrammi LOD/LOQ per chinoloni selezionati |
1.4. Test di precisione
Una soluzione standard mista di antibiotici chinolonici a tre concentrazioni (10, 50 e 100 ng/mL) è stata iniettata per 6 volte per confrontare le variazioni del tempo di ritenzione e dell'area del picco. Come mostrato nella tabella sottostante, tutti i composti chinolonici testati hanno dimostrato deviazioni del tempo di ritenzione inferiori allo 0,3% e deviazioni dell'area del picco inferiori al 5%, rispettando pienamente il requisito dello standard nazionale di RSD ≤15% per la precisione.
Tabella 5 Test di precisione di vari composti
Fig. 4 Cromatogrammi di precisione di composti selezionati
2. Conclusione
Questo metodo ha impiegato il sistema di spettrometria di massa tandem a cromatografia liquida Wayeal LCMS TQ9200 per la determinazione degli antibiotici chinolonici nei campioni di pollo. I dati sperimentali hanno dimostrato eccellenti prestazioni cromatografiche con forme di picco ben definite e assenza di tailing per tutti gli analiti, soddisfacendo al contempo i requisiti di sensibilità specificati negli standard nazionali. Il metodo ha mostrato una buona linearità con coefficienti di correlazione (R²) superiori a 0,99 per tutte le curve di calibrazione, insieme a un'eccellente riproducibilità come evidenziato da deviazioni del tempo di ritenzione inferiori allo 0,3% e variazioni dell'area del picco inferiori al 5%. L'analisi di tre lotti di campioni di pollo preparati indipendentemente non ha mostrato residui rilevabili di antibiotici chinolonici. Questi risultati confermano che il metodo analitico accoppiato al sistema Wayeal LC-MS/MS è pienamente in grado di soddisfare i requisiti di rilevamento qualitativo e quantitativo di routine per gli analiti target nei campioni di prova.
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