Determinazione dei residui di resina nelle saponine di Panax Notoginseng mediante gascromatografo Wayeal GC6100

La gascromatografia svolge un ruolo di fondamentale importanza nella rilevazione dei residui di resina nelle saponine del Panax notoginseng. Panax notoginsengle saponine fungono da materia prima principale per farmaci cardiovascolari e cerebrovascolari come Xueshuantong e il loro processo di purificazione impiega comunemente resine di adsorbimento macroporose. Tuttavia, questo processo può introdurre residui di solventi organici dannosi, tra cui n-esano, benzene, toluene, xilene, stirene e divinilbenzene. Questi residui sono potenzialmente tossici per il corpo umano; pertanto, è essenziale stabilire metodi analitici sensibili e accurati per un monitoraggio rigoroso.

Questo studio è stato condotto in conformità con l'ultima edizione della Farmacopea Cinese, utilizzando il gascromatografo Wayeal Technology GC6100 dotato di un rilevatore a ionizzazione di fiamma (FID) e accoppiato con un campionatore automatizzato a spazio di testa per la determinazione dei residui di resina nei campioni di saponina di Panax notoginseng.

Parole chiave: saponine del Panax notoginseng; solventi residui; gascromatografia; rilevatore FID; spazio di testa.

1. Metodo dell'esperimento

1.1 Configurazione dello strumento

Tabella 1 Elenco delle configurazioni del gascromatografo

1.2 Materiali sperimentali e attrezzature ausiliarie

Standard di riferimento: materiali di riferimento certificati di n-esano, benzene, toluene, p-xilene, o-xilene, stirene, 1,2-dietilbenzene e soluzioni standard di divinilbenzene (acquistati internamente), conservati in contenitori sigillati sotto refrigerazione e protetti dalla luce;

N,N-dimetilformammide;

Gas di trasporto: azoto ad elevata purezza;

Generatore di idrogeno;

Generatore d'aria;

Campionatore automatico per spazio di testa;

Fiale per spazio di testa: fiale in vetro per spazio di testa (20 ml).

1.3 Condizioni di prova

1.3.1 Condizioni di riferimento per il campionatore per spazio di testa

Temperatura del forno: 90°C;

Tempo di incubazione: 30 minuti;

Temperatura valvola iniezione: 110°C;

Temperatura linea di trasferimento: 120°C;

Volume di iniezione: 1,0 ml (volume del circuito).

1.3.2 Condizioni operative di riferimento per il gascromatografo

Colonna analitica: colonna capillare FFAP, 30 m×0,25 mm×0,25µM

Programma di temperatura: temperatura iniziale della colonna di 60°C mantenuto per 16 minuti, poi aumentato a 200°C ad una velocità di 20°C/min e mantenuto per 2 minuti;

Portata della colonna: 1,0 ml/min;

Temperatura di ingresso: 240°C;

Temperatura del rilevatore: 300°C;

Portata d'aria: 300 ml/min;

Portata dell'idrogeno: 40 ml/min;

Portata del trucco: 20 ml/min;

Iniezione divisa con un rapporto di divisione di 2:1.

1.4 Preparazione della soluzione

1.4.1 Preparazione della soluzione madre standard di riferimento

Pesare accuratamente quantità appropriate degli standard di riferimento di n-esano, benzene, toluene, p-xilene, o-xilene, stirene, 1,2-dietilbenzene e divinilbenzene e sciogliere in N,N-dimetilformammide per preparare una soluzione contenente 20µg/mL ciascuno di n-esano, toluene, p-xilene, o-xilene, stirene, 1,2-dietilbenzene e divinilbenzene e 4µg/mL di benzene, rispettivamente, che funge da soluzione madre standard di riferimento.

1.4.2 Preparazione della soluzione di lavoro standard mista

Trasferire accuratamente 2 ml della soluzione madre standard di riferimento in un matraccio tarato da 50 ml, diluire a volume con una soluzione di N,N-dimetilformammide al 25% e mescolare bene. Trasferire accuratamente 5 ml di questa soluzione in una fiala con spazio di testa da 20 ml, sigillare e ottenere la soluzione di lavoro standard mista.

1.4.3 Preparazione della soluzione standard per il test del limite di rilevamento

Trasferire accuratamente 2 ml della soluzione madre standard di riferimento in un matraccio tarato da 500 ml, diluire a volume con una soluzione di N,N-dimetilformammide al 25% e mescolare bene. Trasferire accuratamente 5 ml di questa soluzione in una fiala con spazio di testa da 20 ml, sigillare e ottenere la soluzione standard per il test del limite di rilevamento.

2. Risultato e discussione

2.1 Analisi qualitativa degli standard di riferimento

Fig 1 Cromatogramma del solvente del bianco

Fig 2 Cromatogramma della soluzione di lavoro standard mista

Tabella 2 Parametri cromatografici della soluzione di lavoro standard mista

Nota: i cromatogrammi sopra riportati hanno mostrato che tutti i picchi cromatografici sono ben separati gli uni dagli altri, con risoluzioni superiori a 1,5, soddisfacendo i requisiti per l'analisi sperimentale.

2.2 Test di ripetibilità

Fig 3 Cromatogrammi sovrapposti della soluzione di lavoro standard mista per il test di ripetibilità (n=5)

Tabella 3 Parametri cromatografici della soluzione di lavoro standard mista per il test di ripetibilità

Nota: la soluzione di lavoro standard mista è stata iniettata continuamente per 5 volte e la RSD delle aree dei picchi lo è stata≤1,5%.

2.3 Limite di rilevamento

Fig 4 Cromatogramma della soluzione standard per il test del limite di rilevazione

Tabella 4 Parametri cromatografici della soluzione standard per il test del limite di rilevabilità

Nota: il limite di rilevamento (LOD) è stato determinato con un rapporto segnale/rumore (S/N) di 3, mentre il limite di quantificazione (LOQ) è stato determinato con un rapporto segnale/rumore (S/N) di 10. Entrambi i valori LOD e LOQ sono risultati conformi ai requisiti dello standard.

2.4 Analisi del campione

Pesare accuratamente circa 0,1 g di ciascun campione (rispettivamente 0,1017 g, 0,1026 g e 0,1023 g) in fiale separate da 20 ml con spazio di testa, quindi aggiungere accuratamente 5 ml di soluzione di N,N-dimetilformammide al 25% in ciascuna fiala, sigillare e agitare bene per miscelare.

Fig 5 Cromatogrammi sovrapposti delle tre soluzioni campione

Fig 6 Cromatogrammi sovrapposti della soluzione campione e della soluzione standard di riferimento

Nota: nei campioni non è stato rilevato n-esano, benzene, toluene, p-xilene, o-xilene, stirene, 1,2-dietilbenzene o divinilbenzene.

3. Conclusione

In questo studio, un gascromatografo Wayeal GC6100 dotato di un rilevatore a ionizzazione di fiamma (FID) e accoppiato con un campionatore automatizzato per spazio di testa è stato utilizzato per la determinazione dei residui di resina nei campioni di saponina Panax notoginseng. I risultati sperimentali hanno dimostrato che tutti i picchi cromatografici erano ben separati, con risoluzioni superiori a 1,5, soddisfacendo i requisiti per gli scopi analitici. I risultati dei test di ripetibilità e limite di rilevamento di questo metodo hanno tutti soddisfatto i requisiti specificati. Nei campioni di prova non è stato rilevato n-esano, benzene, toluene, p-xilene, o-xilene, stirene, 1,2-dietilbenzene o divinilbenzene, il che indica risultati soddisfacenti. Questi risultati dimostrano che il gascromatografo Wayeal GC6100 è pienamente in grado di soddisfare i requisiti analitici per la determinazione dei residui di resina nei campioni di saponina Panax notoginseng.

4. Attenzione

Tutte le operazioni che comportano la preparazione di solventi e soluzioni standard, nonché il pretrattamento dei campioni, devono essere eseguite sotto una cappa aspirante. È necessario indossare dispositivi di protezione individuale adeguati in conformità con le norme di sicurezza del laboratorio per evitare il contatto con la pelle e gli indumenti.