Determinazione dell'Uridina 5'-Monofosfato negli Integratori Alimentari mediante Cromatografia Liquida ad Alte Prestazioni

Come nucleotide, l'Uridina 5'-monofosfato (UMP) è un intermedio fondamentale nel metabolismo degli acidi nucleici negli organismi viventi. È il nucleotide più abbondante nel latte dei mammiferi e il fabbisogno alimentare di uridilato è significativamente più elevato rispetto ad altri nucleotidi durante la crescita e lo sviluppo della prole. Negli ultimi anni, la ricerca ha rivelato che l'UMP non solo partecipa al metabolismo energetico e alla sintesi dell'RNA, ma migliora anche la funzione della barriera intestinale modulando le vie di segnalazione cellulare. Inoltre, agisce sinergicamente con le vitamine liposolubili per promuovere l'assorbimento dei nutrienti e la funzione immunitaria. L'UMP viene comunemente aggiunto come fortificante nutrizionale agli alimenti per l'infanzia e ai mangimi per il bestiame/pollame, dove la sua purezza e concentrazione hanno un impatto diretto sul valore nutrizionale e sulla sicurezza del prodotto finale.

Parole chiave:Fortificante nutrizionale alimentare, UMP, Nucleotidi, Cromatografia liquida ad alte prestazioni.

1. Strumenti e reagenti

1.1 Elenco configurazione HPLC

Tabella 1 Elenco configurazione HPLC

1.2 Reagenti e standard

Tabella 2 Elenco reagenti e standard

1.3 Materiale sperimentale e attrezzature ausiliarie

Pulitore a ultrasuoni

Miscelatore a vortice

2. Metodo e condizioni sperimentali

Colonna cromatografica: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. Risultato dell'esperimento

3.1 Test di idoneità del sistema

Il test di idoneità del sistema ha dimostrato che il picco target era ben definito, con un elevato numero di piatti teorici e nessun picco interferente nelle sue vicinanze, soddisfacendo così tutti i requisiti sperimentali.

Fig. 1 Cromatogramma della soluzione di lavoro standard di Uridina 5'-Monofosfato

Tabella 3 Risultati del test per la soluzione di lavoro standard di Uridina 5'-Monofosfato

3.2 Test di ripetibilità

La soluzione di lavoro standard di Uridina 5'-Monofosfato (UMP) è stata iniettata sei volte. La deviazione standard relativa (RSD) del tempo di ritenzione era dello 0,085% e quella dell'area del picco era dello 0,191%. Entrambi i valori erano inferiori al limite specificato del 2,0%, dimostrando la conformità ai requisiti sperimentali.

Fig. 2 Cromatogrammi del test di ripetibilità dell'Uridina 5'-Monofosfato (UMP)

Tabella 4 Risultati dei test di ripetibilità per l'Uridina 5'-Monofosfato (UMP)

3.3 Test del campione

L'area del picco della soluzione di lavoro standard di 5'-uridina monofosfato (20 mg/L) era 322.525, mentre quella della soluzione del campione di prova era 274.211. Sulla base del metodo dello standard esterno, il contenuto di UMP nel campione è stato determinato essere 17 mg/L.

Fig. 3 Cromatogramma del campione di prova

Tabella 5 Risultati del test del campione

3.4 Test di idoneità del sistema per le sostanze correlate

Il test della soluzione di idoneità del sistema per le sostanze correlate ha dimostrato che tutti i picchi dei composti erano ben definiti, con elevati numeri di piatti teorici e una risoluzione superiore a 2,0, soddisfacendo così i requisiti sperimentali.

Fig. 4 Cromatogramma della soluzione di lavoro standard di 5'-uridina monofosfato (UMP)

Tabella 6 Risultati del test per la soluzione di lavoro standard di 5'-uridina monofosfato (UMP)

3.5 Test di riproducibilità del campione

Dopo sei iniezioni consecutive della soluzione di idoneità del sistema, la ripetibilità del tempo di ritenzione per 5'-UMP, uracile e uridina era rispettivamente dello 0,031%, 0,058% e 0,102%, mentre la ripetibilità dell'area del picco era rispettivamente dello 0,243%, 0,134% e 0,134%, soddisfacendo i requisiti sperimentali.

Fig. 5 Cromatogramma del test di riproducibilità del campione

Tabella 7 Risultati del test per la ripetibilità del tempo di ritenzione delle sostanze correlate

Tabella 8 Risultati del test per la ripetibilità dell'area del picco delle sostanze correlate

3.6 Test di sensibilità per le sostanze correlate

Il rapporto segnale-rumore del picco principale di 5'-UMP nella soluzione di test di sensibilità per le sostanze correlate è significativamente maggiore di 3, soddisfacendo i requisiti sperimentali.

Fig. 6 Cromatogramma della soluzione di test di sensibilità delle sostanze correlate

Tabella 9 Risultati del test della soluzione di sensibilità delle sostanze correlate

3.7 Test delle soluzioni di riferimento e di campione delle sostanze correlate

L'area del picco della soluzione di riferimento (17 mg/L) era 275.856. L'area totale del picco delle impurità nella soluzione di prova, escluso il 5'-uridina monofosfato, era 38.021. Calcolo con il metodo dello standard esterno, il contenuto di impurità nel campione è 2.343 mg/L.

Fig. 7 Cromatogramma del test della soluzione di riferimento delle sostanze correlate

Tabella 10 Risultati del test della soluzione di riferimento delle sostanze correlate

Fig. 8 Cromatogramma del test della soluzione del campione delle sostanze correlate

Tabella 11 Risultati del test per la soluzione del campione correlata

4. Conclusione

In questo esperimento, con riferimento a "GB 1903.69-2024 Standard nazionale per la sicurezza alimentare: 5'-Uridina monofosfato potenziatore nutrizionale alimentare", l'analisi è stata condotta utilizzando un sistema di cromatografia liquida ad alte prestazioni Wayeal LC3200 dotato di un rivelatore ultravioletto. I risultati sperimentali mostrano che il test di idoneità del sistema ha dimostrato buone forme dei picchi per tutti i composti, elevati numeri di piatti teorici e una risoluzione superiore a 2,0, soddisfacendo i requisiti sperimentali. La ripetibilità del tempo di ritenzione per la soluzione di lavoro standard di 5'-Uridina Monofosfato e le sostanze correlate era inferiore allo 0,2% e la ripetibilità dell'area del picco era inferiore allo 0,3%, indicando una buona riproducibilità. La soluzione di test di sensibilità per le sostanze correlate ha mostrato un rapporto segnale-rumore per il picco principale di 5'-Uridina Monofosfato significativamente maggiore di 3, soddisfacendo i requisiti sperimentali. Tutti i risultati dei test del campione erano normali. I dati di cui sopra soddisfano i requisiti dello strumento specificati nel metodo standard.