Residui di Nitroimidazolo nel Maiale: Metodo LCMS-TQ9200 LC-MS/MS Wanyi Validato secondo GB 31658.23-2022

I nitroimidazoli sono farmaci antibatterici e antiprotozoari sintetici che inibiscono efficacemente i batteri anaerobi e i tricomonadi. Un tempo erano ampiamente utilizzati nel bestiame e nell'acquacoltura per controllare le infezioni digestive e le malattie protozoarie, migliorando i tassi di sopravvivenza. Tuttavia, i farmaci capostipiti e i loro metaboliti sono dimostrabilmente tossici: vengono rapidamente metabolizzati negli animali in diversi metaboliti attivi, alcuni dei quali persistono nei tessuti molto più a lungo del composto capostipite.

Studi tossicologici dimostrano che i nitroimidazoli capostipiti e i loro principali metaboliti sono potenzialmente cancerogeni, mutageni e genotossici. I residui negli alimenti di origine animale entrano nel corpo umano attraverso la catena alimentare e l'assunzione a lungo termine a basse dosi può interferire con l'ematopoiesi, danneggiare i cromosomi e aumentare il rischio di mutazioni genetiche. La Cina ha quindi vietato i nitroimidazoli negli animali da produzione alimentare e non è consentito alcun residuo negli alimenti di origine animale, rendendo essenziale un test preciso dei residui per la sicurezza alimentare.

GB 31658.23-2022, lo standard nazionale di sicurezza alimentare per i residui di nitroimidazoli negli alimenti di origine animale mediante cromatografia liquida accoppiata a spettrometria di massa tandem, è la base statutaria per questo lavoro. Copre i farmaci capostipiti e i metaboliti nelle matrici bovine, ovine e di altri animali. Un laboratorio di analisi necessitava di un flusso di lavoro validato per la carne di maiale che coprisse quattro composti target - metronidazolo, idrossimetronidazolo, dimetridazolo e idrossidimetridazolo - inclusi i metaboliti idrossilati che sono più difficili da trattenere e ionizzare, a livelli sub-ppb, con basso carryover e precisione stabile su lunghe sequenze di iniezione.

Pesare 2 g di campione (con precisione di 0,05 g) in una provetta da centrifuga da 50 mL, aggiungere 10 uL di soluzione di lavoro standard interno misto da 1 ug/mL, agitare per 30 secondi e lasciare riposare per 10 minuti. Aggiungere 15 mL di acetato di etile, agitare per 2 minuti e centrifugare a 10.000 giri/min per 5 minuti. Trasferire il surnatante e ripetere l'estrazione una volta con altri 15 mL di acetato di etile. Combinare entrambi gli estratti ed evaporare a secco sotto azoto in un bagno termostatico a 25 gradi C.

Sciogliere il residuo in 5 mL di acido cloridrico 0,1 mol/L, agitare per 1 minuto, aggiungere 5 mL di n-esano, agitare per 1 minuto e centrifugare a 5.000 giri/min per 5 minuti. Scartare lo strato di esano e ripetere il passaggio di sgrassatura una volta con altri 5 mL di esano. Condizionare una cartuccia di estrazione in fase solida con 3 mL di acido cloridrico 0,1 mol/L e 3 mL di metanolo, caricare lo strato acquoso, lavare con 3 mL di acido cloridrico 0,1 mol/L ed eluire con 4 mL di metanolo. Evaporare l'eluato a secco a 35 gradi C sotto azoto, ricostituire in 0,5 mL di acqua, agitare per 1 minuto e filtrare prima dell'iniezione.

La calibrazione abbinata alla matrice in estratto di carne di maiale bianca compensa la soppressione ionica dalla matrice di carne e mantiene la quantificazione affidabile a livello di tracce. Le forme dei picchi erano buone senza code, confermando che l'estrazione con acetato di etile, lo sgrassaggio con esano e la pulizia SPE rimuovono le interferenze a 1 ug/kg.

Il sistema LC-MS/MS Wanyi LCMS-TQ9200 ha fornito un metodo validato per quattro residui di nitroimidazoli nella carne di maiale secondo GB 31658.23-2022. Picchi simmetrici, R2 superiore a 0,9995, precisione entro il 10%, carryover trascurabile e recupero compreso tra il 60% e il 120% dimostrano che il flusso di lavoro soddisfa i requisiti qualitativi e quantitativi di routine per lo screening e la conferma di farmaci veterinari vietati e fornisce una base tecnica affidabile per il monitoraggio del rischio per la sicurezza alimentare.

• L'acquisizione MRM a triplo quadrupolo fornisce la selettività necessaria per confermare i residui vietati a 0,5 ug/kg in una matrice di carne grassa.
• La chimica C18 sub-2 um su una colonna da 2,1 mm a 0,3 mL/min risolve quattro analiti in meno di 8 minuti, con un basso consumo di solvente.
• Gli standard interni marcati isotopicamente correggono le perdite di recupero durante l'estrazione e la SPE, stabilizzando i risultati tra i lotti.
• Lo sgrassaggio con esano prima della SPE protegge la cartuccia e la colonna analitica, prolungando la durata di servizio nei laboratori di analisi dei residui ad alto volume.